沉降菌检测依据 GB/T 16294《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》。浮游菌方法才是 GB/T 16293，两套标准不要混写。
先把四件事分开：
| 口径 | 看什么 | 不是什么 |
|---|---|---|
| 方法 | GB/T 16294（沉降平板法怎么做） | 浮游菌方法 GB/T 16293 |
| 皿 | 常用直径 90mm 的沉降皿 | 接触碟（常见 φ55mm）限值不能直接套用 |
| 暴露时间 | 方法标准常用 30 分钟 | GMP 日常监测常用 4 小时 |
| 限值 | 来自 GMP / 项目标准 | GB/T 16294 不规定 A/B/C/D 级数字 |
操作流程
步骤1：准备培养皿
| 参数 | 要求 |
|---|---|
| 培养皿直径 | 90mm |
| 培养基 | 营养琼脂（NA）或TSA |
| 灭菌方式 | 高压灭菌 121℃ 15min |
| 预培养 | 30-35℃培养48h确认无菌 |
步骤2：布点
| 面积 | 最少采样点数 |
|---|---|
| ≤10㎡ | 2个 |
| 10-50㎡ | 3-5个 |
| 50-100㎡ | 5-8个 |
| >100㎡ | 按 √面积 计算 |
布点位置：工作面高度（0.8m），避开送风口正下方，覆盖关键操作区域和四角。点数是监测方案问题，仍按沉降菌方法 GB/T 16294 执行，不要改写成 GB/T 16293。
步骤3：暴露采样
| 参数 | 要求 |
|---|---|
| 暴露时间（GB/T 16294 方法） | 30分钟 |
| 暴露时间（GMP 监测） | 4小时（A/B/C/D 级限值均按4小时口径给出） |
| 培养皿放置 | 盖子打开，朝上 |
| 开始时间 | 洁净室运行稳定后 |
30 分钟是方法操作时长；合同若按 GMP 监测，暴露和限值都按 4 小时执行，不能拿 30 分钟菌落数去套 4 小时限值。
步骤4：培养和计数
| 参数 | 要求 |
|---|---|
| 培养温度 | 30-35℃ |
| 培养时间 | ≥48h（建议72h） |
| 计数方法 | 肉眼计数菌落 |
| 结果单位 | 与实际暴露一致：CFU/皿/30min 或 CFU/皿/4h |
各等级限值
限值来自 GMP，不是 GB/T 16294。下表按 φ90mm 沉降皿、4 小时暴露列出常用监测数字，与沉降菌检测方法一致；判定以合同和现行 GMP 原文为准。
| GMP等级 | 限值（CFU/皿/4h，φ90mm） |
|---|---|
| A级 | <1 |
| B级 | 5 |
| C级 | 50 |
| D级 | 100 |
注意这张表的限值只适用于 φ90mm 沉降皿、4 小时暴露口径；φ55mm 接触碟是表面微生物的另一套限值（C 级 25、D 级 50 cfu/碟），皿径、暴露口径和限值三者必须一起对应，不能拆开来混用。
采样前的预运行与人员要求
采样数据可不可信，一半取决于采样前的准备。微生物测定前的预运行和人员控制，按洁净室检测认证的通行做法执行（《空气洁净技术》第八章口径）：
| 项目 | 要求 |
|---|---|
| 净化空调系统预运行 | 单向流（5级/百级）不少于10min；非单向流（7级/8级）不少于30min |
| 采样人员 | 不超过2人，穿洁净服 |
| 阴性对照 | 每批带1皿不打开的空白培养皿随采样皿同批培养（经验建议·非规范强制值） |
预运行不够就采样，是”假超标”的高发原因——5级室只运行2分钟就采，本底浓度没冲刷干净，菌落数虚高，复测却正常，白做一轮调查。
超标后的排查顺序
某一点位沉降菌超标，不要先怀疑空调。按下面的顺序排查：先排除操作因素，再查系统性因素。
- 查采样操作：预运行时间够不够、培养皿是否在有效期内、暴露时间是否记错、阴性对照有没有长菌。
- 查人员和清洁：采样人数是否超限、当天该区域是否做过清洁消毒、人员更衣流程是否合规。
- 查环境状态：该房间压差是否偏低、换气次数是否不足、自净时间是否明显变长。
- 查过滤器：对房间高效过滤器做现场检漏，检漏前须把风量调到设计值的80%～120%（《空气洁净技术》第八章检漏前提），泄漏的补漏或更换。
- 处置与复测：彻底清洁后，让净化系统运行达到自净时间再复测；必要时适当加大该房间正压及换气次数，直至复测达标。
浮游菌超标也用同一套排查思路，具体路径可以看浮游菌超标排查。
检测频次怎么定
沉降菌属于”运行中监测”项目，频次分两层理解：
| 层级 | 频次口径 | 依据 |
|---|---|---|
| GMP 日常监测 | 按企业 SOP 和监测方案执行，A/B 级通常逐班或每日 | GMP / 项目标准 |
| 定期综合性能检测认证 | 洁净度等级≤5级最长6个月一次，>5级最长12个月一次 | 《空气洁净技术》第八章认证周期口径 |
注意：GB/T 16294 只规定”怎么测”，不规定”多久测一次”。频次是 GMP 和监测方案层面的要求，不要把方法标准的沉默理解成”无要求”。
常见问题
沉降菌培养要多久，少于48小时行不行？
GB/T 16294 方法口径是 30-35℃ 培养不少于48小时。时间不够就提前计数，长菌慢的菌落会漏计，结果系统性偏低——这种”合格”比超标更危险。
GB/T 16294 换新版了吗，现在按哪版出报告？
GB/T 16294-2025 已发布，2026-11-01 实施，过渡期内新旧版本并存。出检测报告时写明所依据的标准号和年代号即可；监测方案、合同条款里引用了旧版的，注意在实施日前完成文件更新。三个标准的版本差异和受影响文件清单，可以看16292/16293/16294换版与验收合同口径。
沉降菌合格但浮游菌超标，矛盾吗？
不矛盾。沉降菌只捕捉能自然沉降的大粒径微生物，浮游菌用主动采样测空气中悬浮菌总量——两路数据反映的是不同环节。沉降菌合格、浮游菌超标，常见于换气次数不足或过滤器局部泄漏，按上面的排查顺序逐项核查即可。
关于沉降菌和浮游菌的选用对比，参考沉降菌检测方法。关于沉降菌检测的工程陷阱，参考沉降菌检测陷阱。整体的洁净工程规划，建议从总览页面了解。
